Többfényforrású elektroforézis gélképalkotás: festék kiválasztása és reprodukálhatósági megoldás

Modern elektroforézis gélképalkotó technológia a nukleinsavak és fehérjék vándorlását olvasható sávokká és pontokká alakítja, amelyeket mérhetsz, összehasonlíthatsz és védhetsz. Amikor a megfelelő megvilágítás, a festéskémia és az optika összeáll, láthatatlan töredékek lesznek bizonyítékokká – olyan bizonyítékok, amelyek megerősítik az amplikont, validálják a génszerkesztést, ellenőrzik a fehérje tisztaságát, vagy összehangolják a több helyszínes projektet.

(Egy egyszerű genotípusozási módszer a kis CRISPR-Cas9 kimutatására

Agarózgél elektroforézissel indukált indelek | Tudományos jelentések)

Milyen elektroforézis gélképalkotás Egyctuálisan Digen

A gyakorlatban az elektroforézis gélképalkotás a DNS, RNS és fehérje szétválasztási minták rögzítését és számszerűsítését jelenti agaróz vagy poliakrilamid gélen. A festékek interkalizálódnak vagy kötődnek biomolekulákhoz; a megfelelő gerjesztő fény (UV vagy kék) és megfelelő emissziós szűrők feltárják a címkézett célpontokat, és egy nagy érzékenységű kamera rögzíti a jelenetet. Ha ezt a láncot – kémia, világítás, optika és rögzítés – jól csinálod, következetes jelet, széles dinamikai tartományt és megbízható méréseket kapsz, amelyeket reprodukálhatsz.

Ez a munkafolyamat alapját képezte évtizedek felfedezésének. A korai Sanger-szekvenálás a poliakrilamid géleken feloldott DNS-fragmentumok olvasásán alapult. A PCR hangsúlyossá vált, amikor a laborok amplifikált fragmentumokat mutattak az agarózseléken, és dokumentálták az eredményeket. Az alapvető, CRISPR-Cas9 tanulmányok pontos hasadási eseményeket mutattak tiszta, értelmezhető sávokkal. A Human Genome Project során mindenhol jelen voltak a gél dokumentációs rendszerek, amelyek a PCR termékeket és a minőséget ellenőrizték a lejtebb történő elemzés előtt. A minta egyértelmű: ha a képalkotás megbízható, a szétválasztás megbízható adatmá válik.

(CRISPR/Cas9-közvetítésű mutánsok nagy áteresztőképességű genotipizálása

fluoreszkáló PCR-kapilláris gél elektroforézis használatával | Tudományos jelentések)

Gyakori Pain PEz ÉsPiros Rprodukálhatóság

Érettsége ellenére a géldokumentáció még mindig változékonyságot és kétséget okozhat. A fő okok a festékvilágítás eltérése, az összeállítási konfigurációk és a rossz nyilvántartáshigiénia.

• Festék-fény eltérése: Az Ethidium bromid, SYBR Safe, GelRed, Coomassie és fluoreszkáló fehérjefoltok diszkrét gerjesztő/emissziós csúcsokat mutatnak. Egy mindent elfoglaló fényforrás elnyomja a valódi jelet és növeli a háttért.

• Expozíció és fókusz változékonysága: A kézi paraméterválasztás felhasználónként és futásonként változik, ami torzítja a sáv intenzitását, és megnehezíti az időbeli összehasonlítást.

• UV-kitett veszélyek: Hosszú ideig tartó UV-világítás fehéríti, beszíneződik és károsítja a nukleinsavat. A gélek vágása megfelelő árnyékolás nélkül veszélyezteti mind a személyzetet, mind a mintákat.

• Jegyzetelési hibák: A kézzel bevitt létraméretek hibákat és lassú értékelést eredményeznek a megosztott adathalmazokban.

• Hiányzó metaadatok: Ha nem rögzítik a világítási típust, szűrőkonfigurációt, expozíciót, nyereséget és akciónyomokat, az csökkenti a nyomon követhetőséget és aláássa az auditokat.

• A következmények kivárhatóak: elszigetelt munkafolyamatok, ismétlődő képalkotások vagy újraindítások, és gyengébb bizalom a közeli korlátok között. Egy festéktudatos, többfényforrású megközelítés, amely a szabványosított rögzítéssel és a robusztus metaadatokkal kombinálva bezárja ezeket a hiányosságokat.

Egy MLegfrissebbLIgen-SOurce Workflow esetén REliable GA DKizárás

Egyszerű, módszerközpontú megközelítést alkalmazzunk, amely a célokat a festékkémia és a megfelelő megvilágítás felé térképezi, majd rögzíti a rögzítést és a dokumentációt.

• Határozd meg a végpontot: Ellenőrized a jelenlétet/hiányt, megerősíted a méretet, vagy félig kvantitatív elemzést végzel? Válassz olyan festéket, amely megfelel a célpontodnak (DNS, RNS vagy fehérje), valamint a szükséges érzékenységnek és biztonsági profilnak.

• Igazítsd a festéket a fényhez: Használj UV-gerjesztést klasszikus interkalátorokhoz, amikor a felső szintű fényerőre van szükséged, és a DNS integritása kevésbé prioritás. Válassz kék fény gerjesztést a következő generációs festékekhez, hogy megőrizze a fragmentumokat klónozáshoz vagy szekvenáláshoz. Válts fehér fényre kromogén fehérjefestéshez és kolónia képalkotáshoz.

• Szabványosítsd a rögzítést: Kapcsold be az automatikus expozíciót és az autofókuszt, hogy a paraméterek egységesen maradjanak a felhasználók és napok között. Nézz meg egy élő hisztográfiát, és kerüld el a telítettséget a fix maximális küszöbértékek beállításával.

• Létrával rögzíts: Legyen molekuláris súlylétrát minden gélben. Használj automatikus létrafelismerést, hogy a sávméreteket következetesen címkézzék kézi erőfeszítés nélkül.

• A metaadatok rögzítése alapértelmezettben: naplózás világítási típus, szűrő, expozíció, fókusz, operátor, időbélyegek és feldolgozási lépések. A szerepkör-alapú jóváhagyások és alapos auditkövetések lehetővé teszik a megfelelőséget és a csapatok közötti együttműködést.

• Védd a gyenge sávokat: Válassz egy nagy érzékeny, alacsony zajérzékelőt, hogy előhozd a halvány sávokat anélkül, hogy túlzottan felfednéd a fényes sávokat. Az egyenletes háttér és a sík mező megvilágítás ugyanolyan számít, mint a nyers megapixelek.

• Biztonságos kiszúrás: Gél eltávolításhoz UV-védőlemezt használjon a felhasználók védelmére és a fragmentum integritásának megőrzésére. Időbélyegzett képeket készíts a kivágás előtt és után, hogy nyomon követhető legyen a nyilvántartás.

Egy Integrated SAzt alapozza MAkes Caz onsistencia NORM

Egy modern géldokumentációs rendszer képes egyetlen műszerben összevonni az optikát, vezérlőket és szoftvereket, így az Electrophoresis Gel Imaging ismételhető az antábok és csapatok között. A fényes, érzékeny érintőképernyő gyors, beépített feldolgozást tesz lehetővé külső számítógép nélkül, így lerövidítve a képzési időt. Egy nagy érzékenységű, 6,3 MP CMOS kamera tiszta sávokat biztosít alacsony fényviszonyosság alatt, megőrizve a dinamikai tartományt és védve a finom mintákat.

Az áteresztő UV, kék és fehér fény támogatásával kiválaszthatod a legjobb fényt a folthoz – legyen szó nukleinsav-gélekről, fehérjegélekről vagy foltmentes munkafolyamatokról. Az intelligens automatizálás csökkenti a dolgazást. Az automatikus expozíció és fókusz egyenletes képet biztosít. Szükség esetén a fejlesztések alkalmazhatók, miközben a nyers adatok újraelemzésre és auditra is rendelkezésre állnak. Az automatikus létrafelismerés azonosítja a jelölőket, és méretcímkéket alkalmaz, hogy egyszerűsítse a dokumentációt és csökkentse a hibákat.

A nyomon követhetőségi funkciók, mint a szerepalapú felhasználói menedzsment, kategorizált tevékenységnaplók és végpontig auditív nyomok, védhető rekordot hoznak létre a beszerzéstől az exportig. Biztonsági kiegészítők, köztük az UV-árnyékoló vágólemez, segítenek megvédeni a felhasználókat a gél eltávolítása közben és megőrizni a minták minőségét.

A többalkalmazású laborok kulcsfontosságú előnyei a következők:

• Magas érzékenység alacsony háttérrel a gyenge sávok és alacsony mennyiségű célpontok észlelésére.

• Széles körű foltkompatibilitás, amely támogatja az UV, kék és fehér fény munkafolyamatait.

• Mindent egyben egy egységben integrált érintőképernyős vezérléssel a beállítási bonyolultság minimalizálására.

• Automatikus rögzítés és létra megjegyzések az operátor torzításának és változékonyságának csökkentése érdekében.

Végponttól végpontig nyomon követhetőség szerepek, naplók és auditok révén a magabiztos értékelés érdekében. A képminőséget és a megbízhatóságot növelő legjobb gyakorlatok

A kis szokások magasabb minőségű, reprodukálhatóbb eredményekhez alakulnak:

• Tartsd a gellä vastagságát, a pufferösszetételt és a hőmérsékletet stabilan a migráció stabilizálása érdekében.

• Teszteljen minden fény alatt a festékeket, és mentse el a festőfény párokhoz kapcsolódó expozíciós előbeállításokat.

• Kerüljék a mennyiségezést telített sávokban; Ellenőrizd a lineáris tartományt soros hígításokkal, ha lehetséges.

• Rendszeresen tisztítsd és szervizeld a lencséket és szűrőket, valamint tesztképekkel ellenőrizd a sík, egyenletes megvilágítást.

•A helyszíneken átívelő munkához ossza meg azokat a sablonokat, amelyek harmonizálják a létra típust, annotációs irányelveket, fájlelnevezést és exportformátumokat.

Alkalmazások Egykeresztezni a Bench

Egy robusztus gel doc rendszer túlmutat a klasszikus agarózzseléken. Használd a klónozási betétek és szekvenálási előkészítés ellenőrzésére, fehérjekifejeződés és tisztaság profilítására SDS-PAGE-en, kolónialemezek dokumentálására fehér fényben, vagy multiszínes fluoreszkáló címkék rögzítésére multiplex kiolvasókhoz. A foltmentes fehérjemunkafolyamatok előnyei a gyengéd megvilágításnak és az érzékeny érzékelésnek. Minden esetben a többfényforrású vezérlés és az automatizált rögzítés újratömöríti, lerövidíti az értékelési ciklusokat, és javítja a jelentések és publikációk tisztaságát.

• Változóból kiszámíthatóvá

Az elektroforézis gélképalkotásnak nem szabad mozgó célpontnak lennie. Ha a festéktudatos világítást a nagy érzékenységű optikával és auditra alkalmas szoftverekkel hangoljuk össze, a próbálkozás-hibázást definiált módszerekre cseréljük, amelyek műszereken és csapatokon átívelődnek. Akár protokollokat harmonizálsz egy növekvő laborban, új munkatársakat veszel be, vagy szabályozói ellenőrzésekre készülsz, egy reprodukálható képalkotási szakasz bizalmat növel minden közzétett számban és minden későbbi döntésben.

Felhívás EgyTon

Vigye be a megbízható, érzékeny elektroforézis gél dokumentációt a napi rutinjába. Kérj élő demót a kedvenc festékeiddel, hasonlítsd össze az UV és a kék fény teljesítményét egymás mellett, és nézd át egy mintaadatkészletet, amely audit metaadatokkal kiegészítve. Csapatunk segít kiépíteni a festékvilágítás előbeállításait, engedélyezni az automatikus létra annotációt, és szerepköralapú jóváhagyásokat beállítani, hogy a következő gél ne csak kristálytiszta legyen, hanem megfelel és ismételhető is.