Hogyan lehet 10 percre csökkenteni a nukleinsav-elektroforézis idejét?

A nukleinsav-elektroforézis gyakran lassabb, mint kellene, ami időt lop, túlmelegszik a géleket és késlelteti a döntéseket a forgalmas laboratóriumokban.

A fájdalom: Miért tartanak túl sokáig a gélek?

A legtöbb csapat elfogadja a 30-60 perces futásokat "normálnak". De a hosszú futások elrejtik a valós költségeket. A hő felhalmozódik, a sávok elmosódnak, és időt veszít a PCR és a következő lépés között. A klasszikus TAE/TBE puffereket nem nagyobb térerősségű sebességre tervezték. Nyomja meg a feszültséget, és a gél felmelegszik; Hosszabb ideig tart, és torz migrációt vagy gyenge helyreállítást kockáztat. A gél újrafuttatása a kenődés javítására több mint percekbe kerül – csökkenti a bizalmat és eltömíti a munkafolyamatot.

Az ügyfelekkel folytatott beszélgetésekből újra és újra ugyanazokat a fájdalmas pontokat halljuk. A kutatók a PCR-termékek gyorsabb ellenőrzését, nagy áteresztőképességű képernyőket, amelyek nem állnak le, és tiszta szalagokat, amelyek közvetlenül a lekötéshez vagy a gél helyreállításához vezethetnek. A beszerzés olyan fogyóeszközöket szeretne, amelyek tartósak és nem igényelnek állandó cserét. A Longlight Technology-nál feltettünk egy egyszerű kérdést: mi lenne, ha a nukleinsav-elektroforézist megbízhatóan be lehetne fejezni 5-10 perc alatt anélkül, hogy feláldoznánk a későbbi teljesítményt?

❓ Mit mondanak nekünk a laboratóriumok?

A túlmelegedés, a dobás és a futás közötti inkonzisztens puffererő, valamint a későbbi lépések miatti szorongás korlátozza a sebességet. A csapatok haboznak puffert váltani, mert aggódnak a lekötés, az extrakciós hozam vagy az RNS stabilitása miatt. Nem kell választania a sebesség és a minőség között.

(Figuaz 1. ponthoz. Szupergyors futópuffer alkalmazása 0,8% -os agaróz gélre. 1. sáv: D12000

létra (5 μl); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μL)

(Szám 2. Szupergyors futó puffer alkalmazása

1% agaróz gél. 1. sáv: D5000 létra (5 μL); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μL)

(3. ábra. Szupergyors futó puffer alkalmazása

2% agaróz gél. 1. sáv: D1000 létra (5 μL); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μl.)

• A Super Fast Running Buffer teljes mértékben kompatibilis az agaróz gélek különböző koncentrációival (0,8%, 1%, 2%), az ábrán látható módon 1–3. A gélkoncentrációtól függetlenül a nukleinsavsávok kiváló felbontást és tisztaságot tartanak fenn, biztosítva a különböző méretű DNS-molekulák elválasztásának kísérleti igényeit.

A javítás: A szupergyors futó puffer magyarázata

Unk 50x Szupergyors futó puffer egy alacsony ionerősségű készítmény, amelyet kifejezetten az agaróz nukleinsav-elektroforézishez fejlesztettek ki. A kisebb ionterhelés kevesebb hőt jelent egy adott mezőben. Párosítsa a megfelelő agaróz koncentrációval, és magabiztosan működhet akár 25-30 V/cm sebességgel, és a gyakran 30 percet igénybe vevő futást mindössze 5-10 percre sűrítheti. Fej-fej melletti használat esetén a csapatok általában ~2,5-3x gyorsabb elválasztást látnak, mint a normál 1x TAE vagy 1x TBE.

Hogyan működik

Az alacsonyabb ionerősség csökkenti a Joule felmelegedését, és segít fenntartani az éles sávokat magasabb feszültségen. Ez a termikus stabilitás megőrzi a DNS és az RNS felbontását, miközben lehetővé teszi a sebességet. Ugyanilyen fontos, hogy a kémia downstream-barát: nem zavarja a DNS-gél extrakcióját vagy lekötését, így közvetlenül a klónozásra, a tisztításra vagy a kvantumra léphet.

• Gyors átfutás: 5-10 perces futások 25 – 30 V/cm sebességgel

• Éles sávok: Nagy felbontás még nagy térerősség mellett is

• Downstream kompatibilitás: Nincs hatással a gél visszanyerésére vagy lekötésére

• Nagyobb visszanyerés: Gyakran meghaladja a TAE/TBE helyreállítási teljesítményt

• Újrafelhasználható pufferkapacitás: Erős pufferelés többféle felhasználáshoz

• Gyors beállítás

Hígítsuk fel a puffert 1:50 arányban, hogy 1x munkaoldatot kapjunk (pl. 20 ml 50x 980 ml desztillált vízbe). Tárolja az 1x-et szobahőmérsékleten. A legjobb konzisztencia érdekében használja ugyanazt az 1x tételt a gél öntéséhez és futtatásához; A különböző tételek keverése megváltoztathatja a puffer erősségét a gél határfelületén. Ne hígítsa 1x alá – ez rendellenes migrációt idéz elő.

Működési feltételek

Futtassa 25-30 V/cm gél hosszúsággal, és állítsa be a tartály geometriája és termikus viselkedése alapján. Mint minden nagy mezős futásnál, ellenőrizze az áramellátás határértékeit; Ha áram vagy voltage lefelé sodródik, ellenőrizze, hogy a műszer korlátozza-e az áramot vagy a teljesítményt. A festés rugalmas: adjon festéket a gélhez vagy a folthoz a futás után – mindkettő működik.

• Biztonság és stabilitás

A folyamatos futás vagy a magas környezeti hőmérséklet megemelheti a puffer hőmérsékletét. Ha szükséges, hűtse le a készüléket, vagy tegye jégre a felbontás védelme érdekében. A pontosság fenntartása érdekében rendszeresen cserélje ki a puffert. Tárolja mind az 50-szeres készletet, mind az 1-es munkaoldatot szobahőmérsékleten; ajánlott körülmények között a stabilitás a kézhezvételtől számított legalább 12 hónap. Mint mindig, viseljen laboratóriumi köpenyt és eldobható kesztyűt. Ez a termék szakemberek számára kutatási célokra készült.

Valós nyereségek és hogyan kezdjük el

Ha a sebesség megbízható, minden javul. Az 5-10 perces gél lehetővé teszi a PCR ellenőrzését, a könyvtár előkészítésének beállítását vagy a ligáció érvényesítését anélkül, hogy a nap kisiklana. A nagy áteresztőképességű csoportok esetében a gyorsabb gélek feloldják az üzenetsorok eltömődését és növelik az átviteli sebességet. Ez több adatot jelent ebéd előtt – és kevesebb esti ismétlést.

A Longlight Technology-nál azért építettük fel ezt a puffert, hogy segítsünk a csapatoknak lerövidíteni a hipotézis és az eredmény közötti hurkot. A kísérleti telepítések során a laboratóriumok tisztább sávokról számoltak be a magasabb mezőkön, simább átadásról a ligálásra és jobb gélextrakciós hozamról a régi pufferekhez képest. Az újrafelhasználhatóság és a koncentrált 50-szeres formátum a költségszabályozást is támogatja: egy palack sokat segít, az erős pufferkapacitás pedig kevesebb cserét jelent a futás közepén.

A gyors nukleinsav-elektroforézis legjobb gyakorlatai

• Öntsük és futtassuk ugyanazzal az 1x tétellel a konzisztencia érdekében.

• Kezdje 25 V/cm-rel, majd haladjon 30 V/cm felé, ahogy a beállítás lehetővé teszi.

• Figyelje a puffer hőmérsékletét hosszabb futási sorozatokon; szükség szerint hűtsük le.

• Tartsa a feszültséget 200 V alatt, ha TAE/TBE-cast gélt dob a gyorspufferbe; A nagyon magas feszültségek torzíthatják az eredményeket ebben a forgatókönyvben.

• Ahol ragyog

Rövid ellenőrzési futtatások, gyors ellenőrzések a klónozás során, több tucat PCR-amplikon szűrése és az RNS-munkafolyamatok felgyorsítása, amelyek jellemzően a hagyományos rendszerekben kúsznak. Ha csapata több időt tölt a gélekre való várakozással, mint az eredmények alapján cselekszik, a nyereség azonnali.

Fina gondolatok

Készen áll arra, hogy 10 percre csökkentse a nukleinsav-elektroforézis idejét – anélkül, hogy a tisztaságot vagy a gyógyulást kicserélné? Beszéljen a Longlight Technology-val még ma, hogy mintát kérjen, SOP-sablont szerezzen, vagy áttekintse a géldoboz kompatibilitását. Változtassuk a szűk keresztmetszetekből származó gélfutásokat gyors ellenőrző ponttá, és tartsuk mozgásban a kísérleteket.