Hogyan lehet 10 percre csökkenteni a nukleinsav-elektroforézis idejét?

A nukleinsav elektroforézis gyakran lassabb, mint kellene – időt lop, túlmelegít a géleket, és késlelteti a döntéseket a forgalmas laborokban.

A fájdalom: Miért tartanak túl sokáig a gélek?

A legtöbb csapat elfogadja a 30-60 perces futamokat "normálisnak". De a hosszú futamok valódi költségeket rejtenek. A hő felgyülemlik, a sávok elmosódnak, és időt veszítesz a PCR és a következő lépés között. A klasszikus TAE/TBE puffereket nem magasabb térerősségű sebességre tervezték. Nyomd a feszültséget, és a gél felmelegszik; Ha tovább nyomod, kockáztatod a torz migrációt vagy a rossz helyreállítást. A gél újrafuttatása a kenőrendszer javítására több mint percek költsége – csökkenti a bizalmat és eltömi a munkafolyamatot.

Az ügyfelekkel folytatott beszélgetésekből újra és újra ugyanazokat a fájdalmas pontokat halljuk. A kutatók gyorsabb PCR vizsgálatokat, nagy áteresztőképességű szűrőket, amelyek nem állnak le, és tiszta szalagokat szeretnének, amelyek közvetlenül ligációhoz vagy gélregenerációhoz vezethetnek. A beszerzés olyan fogyókat szeretne, amelyek tartósak és nem igényelnek folyamatos cserét. A Longlight Technology-nál egyszerű kérdést tettünk fel: mi lenne, ha a nukleinsav elektroforézis megbízhatóan 5-10 perc alatt elkészülne anélkül, hogy feláldoznánk a lefelé irányuló teljesítményt?

❓ Mit mondanak nekünk a laboratóriumok?

A túlmelegedés, a dobás és futás közötti puffererőség nem következetlen, valamint a lefelé irányuló lépések miatti szorongás korlátozza a sebességet. A csapatok haboznak a puffereket cserélni, mert aggódnak a ligáció, a kivonási hozamért vagy az RNS stabilitása miatt. Nem kellene választania a sebesség és a minőség között.

(Figuaz 1. ponthoz. Szupergyors futópuffer alkalmazása 0,8% -os agaróz gélre. 1. sáv: D12000

létra (5 μl); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μL)

(Szám 2. Szupergyors futó puffer alkalmazása

1% agaróz gél. 1. sáv: D5000 létra (5 μL); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μL)

(3. ábra. Szupergyors futó puffer alkalmazása

2% agaróz gél. 1. sáv: D1000 létra (5 μL); 2. sáv: 4 μl; 3. sáv: 3 μl; 4. sáv: 2 μl; 5. sáv: 1 μl.)

• A Super Fast Running Buffer teljes mértékben kompatibilis az agaróz gélek különböző koncentrációival (0,8%, 1%, 2%), az ábrán látható módon 1-3. A gélkoncentrációtól függetlenül a nukleinsavsávok kiváló felbontást és tisztaságot tartanak fenn, biztosítva a különböző méretű DNS-molekulák elválasztásának kísérleti igényeit.

A javítás: A szupergyors futó puffer magyarázata

Unk 50x Szupergyors futó puffer egy alacsony ionszilárdságú készítmény, amelyet kifejezetten agaróz nukleinsav elektroforézisre építettek. Kevesebb ionos terhelés kevesebb hőt jelent egy adott mezőn. Ha ehhez hozzávesszük a megfelelő agaró koncentrációt, magabiztosan tudsz 25-30 V/cm-nél is működni, így egy gyakran 30 percig tartó futamot 5-10 percre nyomítasz. Fej-fej elleni használatban a csapatok általában ~2,5-3x gyorsabb távolságot tapasztalnak, mint a szabványos 1x TAE vagy 1x TBE.

Hogyan működik

Az alacsonyabb ionerősség csökkenti a Joule felmelegedését, és segít fenntartani az éles sávokat magasabb feszültségen. Ez a termikus stabilitás megőrzi a DNS és az RNS felbontását, miközben lehetővé teszi a sebességet. Ugyanilyen fontos, hogy a kémia downstream-barát: nem zavarja a DNS-gél extrakcióját vagy lekötését, így közvetlenül a klónozásra, a tisztításra vagy a kvantumra léphet.

• Gyors fordulat: 5 - 10 perces futás 25 - 30 V/cm sebességgel

• Éles sávok: Nagy felbontás még nagy térerősség mellett is

• Downstream kompatibilitás: Nincs hatással a gél visszanyerésére vagy lekötésére

• Nagyobb visszanyerés: Gyakran meghaladja a TAE/TBE helyreállítási teljesítményt

• Újrafelhasználható pufferkapacitás: Erős pufferelés többféle felhasználáshoz

• Gyors beállítás

Hígítsuk a puffert 1:50-re, hogy 1x működő oldatot készítsünk elő (pl. 20 ml 50x 980 mL desztillált vízbe). Az 1x-et szobahőmérsékleten tárolja. A legjobb állagosság érdekében ugyanazt az 1x adag adag a gél kiöntéséhez és futtatásához; Különböző adagok keverése megváltoztathatja a puffer erősségét a gél felületén. Ne hígítsd 1x alá – az rendellenes migrációt idéz elő.

Működési feltételek

Használd 25-30 V/cm gélhosszon, és igazítsd a tartályod geometriája és hőviselkedése alapján. Mint minden nagy mezőnyű futásnál, ellenőrizd az áramellátás korlátait; Ha áram vagy feszültség lefelé sodródik, ellenőrizd, hogy a műszer áram- vagy teljesítménykorlátozást használ-e. A festés rugalmas: festéket adj a gélre vagy festésre a levezetés után – mindkettő működik.

• Biztonság és stabilitás

A folyamatos futás vagy a magas környezeti hőmérséklet megemelheti a puffer hőmérsékletét. Ha szükséges, hűtse le a készüléket, vagy tegye jégre a felbontás védelme érdekében. A pontosság fenntartása érdekében rendszeresen cserélje ki a puffert. Tárolja mind az 50-szeres készletet, mind az 1-es munkaoldatot szobahőmérsékleten; ajánlott körülmények között a stabilitás a kézhezvételtől számított legalább 12 hónap. Mint mindig, viseljen laboratóriumi köpenyt és eldobható kesztyűt. Ez a termék szakemberek számára kutatási célokra készült.

Valós nyereségek és hogyan kezdjük el

Ha a sebesség megbízható, minden lefelé javul. Egy 5-10 perces gél lehetővé teszi, hogy ellenőrizze a PCR-t, beállítsa a könyvtári előkészületet, vagy validálja a ligációt anélkül, hogy kizökkenne a nap. Nagy áteresztőképességű csoportoknál a gyorsabb gélek elnyalják a sorokat, és növelik az áteresztőképességet. Ez több adatot jelent ebéd előtt – és kevesebb esti ismétlést.

A Longlight Technology-nál azért építettük fel ezt a puffert, hogy segítsünk a csapatoknak lerövidíteni a hipotézis és az eredmény közötti hurkot. A kísérleti telepítések során a laboratóriumok tisztább sávokról számoltak be a magasabb mezőkön, simább átadásról a ligálásra és jobb gélextrakciós hozamról a régi pufferekhez képest. Az újrafelhasználhatóság és a koncentrált 50-szeres formátum a költségszabályozást is támogatja: egy palack sokat segít, az erős pufferkapacitás pedig kevesebb cserét jelent a futás közepén.

A gyors nukleinsav-elektroforézis legjobb gyakorlatai

• Öntsük és futtassuk ugyanazzal az 1x tétellel a konzisztencia érdekében.

• Kezdje 25 V/cm-rel, majd haladjon 30 V/cm felé, ahogy a beállítás lehetővé teszi.

• Figyelje a puffer hőmérsékletét hosszabb futási sorozatokon; szükség szerint hűtsük le.

• Tartsa a feszültséget 200 V alatt, ha TAE/TBE-cast gélt dob a gyorspufferbe; A nagyon magas feszültségek torzíthatják az eredményeket ebben a forgatókönyvben.

• Ahol ragyog

Rövid ellenőrzési futtatások, gyors ellenőrzések a klónozás során, több tucat PCR-amplikon szűrése és az RNS-munkafolyamatok felgyorsítása, amelyek jellemzően a hagyományos rendszerekben kúsznak. Ha csapata több időt tölt a gélekre való várakozással, mint az eredmények alapján cselekszik, a nyereség azonnali.

Fina gondolatok

Készen állsz, hogy a nukleinsav elektroforézis-idejét 10 percre csökkentsd – anélkül, hogy elveszítenéd a tisztaságot vagy a regenerációt? Beszéljen a Longlight Technology-val még ma, hogy kérjen mintát, kérjen egy SOP sablont, vagy értékeld a géldobozod kompatibilitását. Alakítsuk át a zselés futamokat a szűk keresztmetszetekből gyors ellenőrzőponttá, és folytassuk a kísérleteidet.